在研发针对猫免疫缺陷病毒（FIV）的实验性疫苗过程中，建立可靠的病毒挑战实验模型是验证疫苗效力的关键步骤。本文将从技术和实验操作的角度，解析如何设计和实施FIV的病毒挑战实验，并总结相关的科学细节和注意事项。
一、实验动物的选择与管理
实验选择特定病原体阴性（Specific Pathogen-Free, SPF）的健康成年猫作为试验对象，确保其免疫系统未受病毒或其他病原的干扰。选用4至6个月龄的猫，可以避免幼龄猫发育未完全带来的免疫反应差异，同时减少年龄较大动物因先天免疫应答而影响实验结果的可能性。
在实验开始前，所有实验动物需接受严格的健康筛查，确保其体内无FIV抗体，且血液和唾液样本中不含病毒。实验期间，动物需被单独饲养或按实验组分笼，并由专业兽医每日观察其健康状况，及时记录体重变化、行为反应和临床症状。
二、疫苗的制备与免疫过程
本研究设计了两种疫苗，分别是基于感染细胞的固定疫苗（疫苗1）和灭活病毒疫苗（疫苗2）。以下是两种疫苗的制备过程：
- 疫苗1：感染细胞固定疫苗
该疫苗由感染FIV的猫T细胞制备。通过1.25%的多聚甲醛固定细胞，破坏其活性但保留病毒抗原完整性。固定后的细胞通过离心和透析去除固定剂残留，并加入免疫佐剂以增强其免疫原性。 - 疫苗2：灭活病毒疫苗
从FIV感染细胞的培养上清中提取病毒颗粒，通过0.45微米滤膜去除细胞杂质。随后使用多聚甲醛对病毒进行灭活，确保病毒不具感染性但仍保留完整的结构抗原。
免疫接种按两周为一个间隔周期进行，持续2-5个月，共接种4-6次。每次接种后观察动物是否出现局部或全身不良反应。
三、挑战病毒的制备与接种
为了检测疫苗的保护效果，需要用FIV病毒进行挑战实验。病毒的制备与滴定是该环节的核心：
- 病毒制备
挑战病毒来源于FIV感染细胞的培养上清，通过滤膜过滤确保无活细胞残留，随后保存于-70℃的低温条件下。 - 病毒滴定
通过将病毒液按10倍梯度稀释后感染SPF猫，观察其血液中是否出现FIV的感染指标，如病毒抗原或抗体，以确定50%动物感染所需剂量（ID50）。根据滴定结果选择适当的挑战剂量。本研究中，选用了10倍ID50的低剂量和5 x 10⁴ ID50的高剂量进行试验。 - 病毒接种
在最后一次疫苗接种两周后，用已准备好的病毒挑战动物模型。挑战方式为腹腔内注射（intraperitoneal, i.p.），每只动物接受2毫升病毒液，确保病毒直接进入体内。
四、保护效力的评估
疫苗保护效果的评估采用多层次的检测方法，包括：
- 血清学检测
挑战前后定期采集动物血液，检测FIV抗体水平和中和抗体滴度。采用ELISA检测抗体水平，并通过病毒中和实验评估中和抗体的功能。 - 病毒检测
使用PCR和Southern blot检测外周血白细胞（PBLs）中的病毒DNA，评估是否存在病毒持续性感染。此外，通过细胞培养检测病毒的活性，观察是否能从感染猫的PBL或骨髓样本中分离出病毒。 - 细胞免疫反应
挑战后，通过分析PBL对FIV抗原的增殖反应和IL-2分泌水平，评估T细胞介导的免疫反应是否因疫苗接种而增强。
参考文献：
Experimental Vaccine Protection Against Feline Immunodeficiency Virus
